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什么是质粒克隆载体?
质粒是一种裸DNA分子,寄生在细菌细胞内,不依赖于染色体。质粒是一种DNA分子。
质粒一般以超螺旋DNA的形式存在于宿主细胞中。分子大小也相差很大,从不到2kb到100kb以上,大部分都在10kb左右。在细菌、乳酸菌、蓝藻和酵母等多种生物中发现了质粒,并构建了相应的质粒载体。
质粒载体是基于质粒DNA分子的克隆载体,含有质粒的复制起始位点,可以以质粒复制的形式进行复制。
质粒载体
通过重组DNA技术将有用的靶DNA片段输送到受体细胞中进行繁殖和表达的工具称为载体。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。质粒本身就是一种具有复制功能的遗传结构。质粒也携带一些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。它的自我复制能力和它携带的遗传信息在重组DNA操作中非常有用,如扩增和筛选。
质粒载体是在天然质粒的基础上人工构建的,以适应实验室操作。与天然质粒相比,质粒载体通常携带一个或多个选择标记基因(如抗生素抗性基因)和一个含有多个限制性内切酶识别位点的合成多克隆位点序列,去除了大部分不必要的序列,从而尽可能降低分子量,便于基因工程操作。大多数质粒载体都有一些多用途的辅助序列,包括用组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、生成用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、大规模表达外源基因等。理想的克隆载体应具有以下特征:分子量小,多拷贝,松弛可控;⑵具有多种常用的限制性内切酶;⑶可以插入大的外源DNA片段;⑷有两个以上的遗传标记,便于鉴定和筛选。⑸对宿主细胞无害。常用的质粒载体大小一般在1kb到10kb之间,如PBR322、PUC系列、PGEM系列、PET系列、pBluescript(简称pBS)。